+7 (3463) 517-703

Фрагментация ДНК сперматозоидов

Фрагментация ДНК сперматозоидов

Фрагментация ДНК сперматозоидов является относительно недавно открытой, интенсивно исследуемой в последнее десятилетие причиной мужского бесплодия и отцовского эффекта нарушений раннего эмбрионального развития. Причинами разрывов ДНК считают процессы изменения структуры хроматина в ходе сперматогенеза и апоптоз. Для оценки фрагментации ДНК и апоптотических маркеров сперматозоидов в настоящее время разработан целый ряд методических подходов. Высокий процент сперматозоидов с повреждениями ДНК не всегда коррелирует с обычными параметрами спермограммы. В то же время фрагментация ДНК сперматозоидов может оказывать влияние на ранние этапы эмбрионального развития, особенно на формирование бластоцисты и частоту наступления беременности в циклах ЭКО/ИКСИ.

В среднем 20% эякуляторных сперматозоидов мужчин с различными параметрами спермограммы выявляются как апоптотические при исследовании с использованием как аннексина, так и метода TUNEL. Установлено, что фрагментация ДНК в эякуляторных сперматозоидах существенно выше, чем в тестикулярных (23% против 4,3%). Предположение о корреляции между морфологическими параметрами сперматозоидов и фрагментацией ДНК было выдвинуто на основании того, что важная роль апоптоза соматических клеток состоит в устранении дефектных клеток: ДНК разрушается в аномальных сперматозоидах, по аналогии с различными соматическими клетками. По данным, апоптотическая фрагментация ДНК ниже в группе мужчин с нормозооспермией в сравнении с группами мужчин с олигоастенотератозооспермией, различной андрологической патологией и тестикулярным раком. Предполагается, что апоптоз служит конечным результатом различных патологических состояний и системой деградации, контролирующей сперматогенез.

Аномалии хроматина сперматозоидов часто ассоциированы с плохими показателями спермограммы, однако многие исследователи констатируют, что параметры фрагментации не имеют четкой корреляции с параметрами спермы, рекомендованными к исследованию ВОЗ (концентрацией, подвижностью, морфологией). По некоторым данным, не выявляется достоверной разницы в апоптотическом индексе между сперматозоидами, определяемыми как нормальные и аномальными по критериям ВОЗ. Сперматозоид, морфологически расцененный как «нормальный», может иметь поврежденную ДНК. Так, в исследовании из 5 пациентов с высоким индексом фрагментации 2 мужчин имели существенные морфологические аномалии сперматозоидов и концентрацию <10•106 в 1 мл. Трое других мужчин имели нормальные параметры спермограммы с концентрацией от 97•106 до 165•106 в 1 мл.

В других исследованиях найдены отрицательные корреляции фрагментации ДНК с характеристиками спермограммы: концентрацией, подвижностью и процентом морфологически аномальных сперматозоидов. Больше всего свидетельств отрицательной корреляции параметров фрагментации ДНК, экстернализации фосфатидилсерина и подвижности. На основании экспериментов с индукцией апоптоза в сперматозоидах предполагается, что подвижность может служить маркером интактной ДНК. Сперматозоиды даже со значительным уровнем повреждений ДНК сохраняют способность оплодотворять ооциты. Однако в дальнейшем эмбриональное развитие может блокироваться на разных этапах. Многие авторы доказывают, что фрагментация ДНК не оказывает влияния на оплодотворение, но имеет важное значение для формирования бластоцист и имплантации. Необходимо отметить, что ни один из рекомендованных ВОЗ параметров спермы, таких как объем, число сперматозоидов, подвижность, морфология не дают прогноза низкой частоты формирования бластоцист.

Результаты работы свидетельствуют о том, что частота наступления беременности в программах ЭКО/ИКСИ не различалась в группах с высоким и низким индексом фрагментации ДНК (DFI). В супружеских парах, где мужчины имели высокий уровень фрагментации ДНК (DFIі30%), была низкой частота формирования бластоцист (<30%) и частота наступления беременности в циклах ЭКО и ИКСИ, а также повышенная вероятность абортов. При этом не выявлено значимой взаимосвязи высокого содержания незрелых сперматозоидов (HDSі15%) и низкой частоты формирования бластоцист. Также не выявлено взаимосвязи HDS и частоты имплантации, наступления беременности и спонтанных абортов. По мнению авторов, популяция незрелых сперматозоидов не ассоциирована с повышенной фрагментацией ДНК. Среди случаев, в которых обычный анализ спермы не выявляет аномалий, 18% мужчин имеют DFIі30% и соответственно плохие шансы формирования бластоцист и положительного исхода ЭКО/ИКСИ. В то же время 39% мужчин с аномальными параметрами спермограммы не имеют повышенного уровня фрагментации ДНК. Они имеют хорошие шансы для достижения супружеской парой беременности в циклах ЭКО и ИКСИ.

Ассоциации между целостностью ДНК эякуляторных сперматозоидов и частотой оплодотворения в ЭКО и ИКСИ не выявлено при использовании SSCA, TUNEL и Comet-анализов.

В противоположность таким исследованиям некоторыми авторами установлена отрицательная корреляция между разрывами ДНК и вероятностью оплодотворения при ЭКО и ИКСИ. Так, в исследовании выявлено, что при фрагментации ДНК >10% (выявленной методом TUNEL) снижается частота оплодотворения, при этом взаимосвязи с морфологией эмбрионов не найдено.

В работе описываются случаи, когда преодоление бесплодия для нескольких супружеских пар с DFI>30% удалось достичь в программах ИКСИ с использованием антиоксидантной терапии. При этом использовалась терапия «Fertility Blend™», включающая L-карнитин и другие антиоксиданты.

Обзор исследований, посвященных фрагментации ДНК сперматозоидов, позволяет заключить, что этот параметр имеет самостоятельное диагностическое и прогностическое значение для пациентов с бесплодием, прибегающим к ВРТ. Несмотря на то что механизмы образования разрывов не до конца ясны, исследование фрагментации ДНК сперматозоидов может улучшить анализ спермы и служить эффективным прогностическим инструментом, выявляющим мужской фактор нарушения фертильности.